• 歡迎訪問杭州安普飼料科技有限公司

    客服電話:18057136993

    新聞中心
    技術專題
    當前位置: 首頁 > 新聞中心 > 技術專題

    溶葡萄球菌酶復合劑體外抗豬大腸桿菌作用檢測

    2016-07-05
    ?
    本研究為委托檢測,按照委托方要求進行試驗。
    一、材料dsfsde
    待檢樣品:由委托方提供,編號分別為1#、2#、3#和4#,外觀為白色粉未。另購商品級飼料添加用溶菌酶復合劑作為對照,編號5#。
    培養基:MH肉湯和藥敏試紙,購自杭州天和生物試劑公司。MH肉湯瓊脂平板,按說明書方法配制。
    試驗菌株:EC-130和EC-142大腸桿菌購自上海衛生防疫站,同時產不耐熱腸毒素(LT)和耐熱腸毒素(ST)。193#、LT8-1、LT16-1、LT9-2、ST13-1、LTST9-1、LTST12-1大腸桿菌分離自臨床腹瀉仔豬,產不耐熱腸毒素(LT)或/和耐熱腸毒素(ST)。
    二、方法
    1、抑(殺)菌作用試驗
    紙片法: 稱取各樣品適量,溶于滅菌蒸餾水中成2%或10%濃度,滴加于直徑5mm的滅菌濾紙片上,每片約含2ul藥液,陰涼干燥,4℃貯存備用。分別取EC-130和139#菌株接種于2毫升MH液體培養基中,37℃培養過夜。取過夜培養的新鮮菌液適量,稀釋后取0.5毫升均勻涂布于MH平板。待平板表面菌液完全吸收無積液后,貼加各樣品紙片試樣,倒置37℃培養過夜,測量抑菌圈直徑的大小,判定結果。
    2、抗菌素抑(殺)菌比較試驗
    紙片法:實驗方法同上,試驗菌株為EC-130。根據抑(殺)菌作用試驗結果,選取3#和4#樣品進行對比試驗,同時貼加不同的抗生素藥敏紙片。
    3、最低抑(殺)菌濃度試驗
    試管法:取滅菌的MH液體培養基,將各待檢樣品稀釋成不同含量,每管2ml,分別每管接種37℃培養過夜的EC-130和139#大腸桿菌5ul,再37℃培養過夜,觀察各試管細菌生長情況。完全抑制細菌生長的最高稀釋培數為試驗樣品的最低抑菌濃度。
    4、不同作用時間的抑(殺)菌效率試驗
    試管法:取37℃過夜培養的EC-130和139#菌株,用MH培養液稀釋成1OD,分別加入各待檢樣品,使成最低抑(殺)菌濃度,37℃培養并立即計時。分別在作用5和8小時取樣,作連續10倍稀釋。定量取適當二個連續稀釋度菌液0.5毫升,均勻涂布于MH平板,每個稀釋度重復二次,待平板表面菌液完全吸收無積液后,倒置37℃培養過夜。計數每平板菌落數量,與不加藥液的細菌數量對照,計算各時間點各待檢樣品的抑(殺)菌率。
    5、臨床分離的致病性大腸桿菌抑(殺)菌試驗
    試管法:將7株豬場臨床分離的致仔豬腹瀉大腸桿菌分別接種于2毫升MH液體培養基中,37℃培養過夜。取滅菌的MH液體培養基,將各待檢樣品系列稀釋成不同含量,每管2ml。將每株37℃培養過夜的大腸桿菌,分別接種每種系列稀釋的試驗樣品管中,每管接種菌液5ul,再37℃培養過夜,觀察各試管細菌生長情況。完全抑制細菌生長的最高稀釋培數為試驗樣品的最低抑菌濃度。
    三、結果
    (一)抑(殺)菌作用試驗
    (1)1和2號樣品對EC-130和193#大腸桿菌均無任何抑菌作用;
    (2)3和4號樣品對EC-130大腸桿菌均有抑菌作用,3號樣品抑菌圈直徑約20mm,4號樣品抑菌圈直徑約9mm。
    (3) 4號樣品對193#大腸桿菌也有明顯的抑菌作用,抑菌圈直徑均為約9mm。而3號樣品對193#大腸桿菌無抑菌作用。
    ?
    ?
    EC-130大腸桿菌           193#大腸桿菌
    ?
    (二)抑(殺)菌效果與部分抗菌素比較試驗
    3號樣品對大腸桿菌的抑菌圈直徑與慶大霉素、先峰V號和丁胺卡那相似,大于多粘菌素,但小于環丙沙星。4號樣品的抑菌圈直徑均小于試驗所用抗菌藥物(見下表和圖)。
    ?

    藥物名稱
    抑菌圈直徑(mm)
    環丙沙星
    36
    慶大霉素
    18
    丁胺卡那
    18
    先峰V號
    20
    多粘菌素
    13
    3#樣品
    22
    4#樣品
    8
    ?

    環丙沙星
    環丙沙星
    慶大霉素
    慶大霉素
    多粘菌素
    先峰V號
    丁胺卡那
    丁胺卡那
    先峰V號
    多粘菌素

    4號樣品對比結果
    3號樣品對比結果
    ?
    ?
    ?
    ?


    ?

    (三)最低抑(殺)菌濃度試驗
    各樣品最低抑菌濃度為2號0.25mg/ml、3號0.5mg/ml、4號0.13mg/ml、5號1.0mg/ml

    樣品
    2.00mg/ml
    1.00mg/ml
    0.50mg/ml
    0.25mg/ml
    0.13mg/ml
    0.06mg/ml
    0.03mg/ml
    2
    3
    4
    5
    注:-表示細菌不生長,+表示細菌生長。
    ?
    ?
    ?
    ?
    ?
    ?

    3號樣品檢測結果
    2號樣品檢測結果
    ?
    ?


    ?

    4號樣品檢測結果
    5號樣品檢測結果
    ?


    ?

    (四)不同時間的抑(殺)菌效率試驗
    用無抗藥性的標準大腸桿菌(EC-130)進行試驗,3號樣品和5號樣品在2.5小時內殺菌效力可達75.7-87.7%,而2號樣品和4號樣品的殺菌效率僅25.5-33.0%。

    樣品
    稀釋度
    0小時
    0.5小時
    1小時
    2.5小時
    計數
    殺菌率
    計數
    殺菌率
    計數
    殺菌率
    計數
    殺菌率
    2號樣
    105
    828
    ?
    539.5
    34.9%
    644
    22.2%
    555
    33.0%
    3號樣
    105
    828
    ?
    633
    23.6%
    734.5
    11.3%
    201.5
    75.7%
    4號樣
    105
    828
    ?
    653.5
    21.1%
    888
    -7.2%
    617
    25.5%
    5號樣
    105
    828
    ?
    495.5
    40.2%
    362.5
    56.2%
    102
    87.7%
    ?
    (五)臨床分離的致病性大腸桿菌抑(殺)菌試驗
     結果表明,2號樣品對參試菌株的抑(殺)菌最低濃度均大于2 mg/ml;
    3號樣品對參試菌株的抑(殺)菌最低濃度為0.5-2 mg/ml以上;
    4號樣品對參試菌株的抑(殺)菌最低濃度為0.125-0.5 mg/ml;
    5號樣品對參試菌株的抑(殺)菌最低濃度為1.0-2 mg/ml以上;
    ?

    樣品
    最低抑菌濃度(mg/ml)
    ST13-1
    LTST9-1
    LT8-1
    EC142
    LTST12-1
    LT16-1
    LT9-2
    2
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    3
    0.5
    >2.0
    >2.0
    0.5
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    4
    0.5
    0.25
    0.125
    0.25
    0.25
    0.25
    0.25
    5
    1.0
    >2.0
    >2.0
    1.0
    >2.0
    >2.0
    >2.0
    ?
    四、結 論
    (一)1號樣品無抑(殺)大腸桿菌活性。
    (二)2號樣品微溶于水,無法完全溶解,實驗結果不穩定(結果未顯示)。平板抑菌試驗無明顯抑(殺)菌活性,但在液體培養基中有一定的抑(殺)菌活性??赡苁?號樣品在水中的溶解差,在平板上難以擴散之故。
    (三)3號樣品對無抗藥性的標準大腸桿菌具有較好的抑(殺)菌活性,平板試驗抑(殺)菌效果與慶大霉素、先峰V號和丁胺卡那相似。在液體培養基中,最低抑(殺)菌濃度為0.5mg/ml。但對臨床分離的致腹瀉大腸桿菌無明顯抑(殺)菌作用,即對具有抗藥性的大腸桿菌抑(殺)菌效果不佳。
    (四)4號樣品對所有試驗菌株均有效好的抑(殺)菌活性,對無抗藥性的標準大腸桿菌最低抑(殺)菌濃度為0.125mg/ml。對臨床分離的致腹瀉大腸桿菌最低抑(殺)菌濃度為0.125-0.5mg/ml。即對具有抗藥性的大腸桿菌抑(殺)菌也有良好的抑(殺)菌效果,值得臨床推廣試用。
    ?
    浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所
    2007年5月12日
    上一頁獸用溶菌酶制劑與蛋清溶菌酶抑菌比較試驗(MIC)
    下一頁溶菌酶可溶性粉劑用于肉雞疾病預防

    版權所有?杭州安普飼料科技有限公司 ???? 備案號:浙ICP備18005852號-1
    一本二本三本是什么意思